人外周血調節性T細胞鑒定方案
CD127 VS Foxp3
雖然Foxp3是目前公認的調節性T細胞最特異的指標，但因其位于細胞內，使得Foxp3的染色必須要固定細胞并破核膜，因此這種方法并不適用于分離活的Tregs，且該方法比較傳統，操作相對復雜，稍有不慎就會影響實驗結果。
而CD127屬于細胞表面Marker，無需固定破膜。因此，當前主流方向是通過CD127來檢測人Tregs。
CD127的發現
CD127是2006年被發現的一種檢測CD4+CD25+調節性T細胞的新指標。由于不需要將細胞固定破膜處理，檢測起來要比Foxp3方便。
研究發現，CD4+CD25+純化的細胞中，CD127與Foxp3的表達呈負相關。通過CD4+CD127low純化出的CD4+CD25+ T細胞，與Foxp3純化的CD4+CD25+ T細胞數量相似，并且這部分細胞展現了CD4+CD25+調節性T細胞的典型特征。CD4+CD25+CD127-/low是較CD4+CD25+Foxp3+更優的特異性檢測Tregs的表面標記分子。
配色方案
人Treg鑒定所需流式抗體
人Treg鑒定所需輔助試劑
樣本管設置
實驗步驟
1、在離心管內加入100μL新鮮血，與2mL 1×ACK紅細胞裂解液混勻，4℃裂解10min；
2、300g離心5min（裂解完立即離心，防止時間過長損傷細胞），棄掉上清，用移液槍輕輕吸走殘液，可以得到白色的細胞沉淀；
3、加入100μL細胞染色緩沖液，重懸細胞，與流式抗體混勻，4℃孵育30min；
4、加入2mL細胞染色緩沖液，300g離心5min，棄掉上清，再加入200μL細胞染色緩沖液，重懸細胞；
5、上機進行檢測。
實驗結果
人外周血Treg細胞表型分析
解析：
熒光素間有溢漏，故需要設置單陽管，用于調節補償；
本實驗取正常人外周血驗證，無生物學對照；
增加CD45指標，便于淋巴細胞圈門；
圈門路徑：
第一步，根據CD45和SSC-H，圈出淋巴細胞群；
第二步，利用FSC-H和SSC-H，去黏連，得到單細胞；
第三步，通過CD3，確定CD3+ T細胞；
第四步，通過CD4和CD8，得到CD4+輔助T細胞；
第五步，通過CD25+CD127-/low，確定出Treg細胞亞群。
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