H9c2（2-1）（大鼠心肌細胞）是由胚胎BD1X大鼠心臟組織衍生的原始克隆細胞系的亞克隆，并表現出骨骼肌的許多特性。該細胞中的成肌細胞能融合形成多核的肌管，并對乙酰膽堿的刺激發生反應。如果培養基中的血清濃度下降到1%，H9c2(2-1)細胞融合會發生得很快。該細胞系是檢測細胞發育的有效模型系統。

本期為大家總結了，在培養H9c2（2-1）細胞過程中，特別需要注意的地方。

細胞復蘇

溶解細胞過程要迅速；已溶解的凍存細胞不能在常溫下存放太久，需要盡快離心去除DMSO。

細胞凍存

推薦配比：55%基礎培養基+40%FBS+5%DMSO的凍存液；

細胞凍存時，盡量吹散細胞，注意控制吹打力度。

細胞培養

H9c2（2-1）細胞為貼壁細胞，正常細胞形態為梭形。

培養條件

培養基：DMEM＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例：1:2-1:4

推薦換液頻率：2~3次/周

培養箱：37℃，5% CO2

傳代操作

去掉培養皿中的培養基，加入PBS進行沖洗，并去上清；

加入0.25%胰酶進行潤洗，并去上清；

放入CO2培養箱消化2-4min；

加入完全培養基終止消化，并吹打均勻。

常見問題及解答

為什么會出現細胞表面顆粒較多的現象？

可能是培養環境有問題，可以改用DMEM/F-12培養基培養，傳三代后會恢復平整細胞表面。

為什么會出現空泡？

可能是鋪板時鋪得不夠均勻，局部過于密集，密集地方的細胞就開始狀態變差、空泡增多。也可能是血清差，需要更換優質血清，及時換液。

為什么細胞長得慢？

可能是細胞接種得太少，細胞密度太低。可以先培養，然后消化重新鋪瓶，提高密度培養。

為什么細胞狀態變差，容易漂？

可能是血清問題，建議換血清，并注意血清要程序解凍，不能水浴化開；也有可能是細胞生長密集，需要及時傳代，并不是細胞長滿才傳代，當有個別地方長得過于密集，容易疊加的時候應該就要傳代了。

注意

在培養過程中，保持細胞匯合度30％～90％；

每一步操作都要輕柔小心，以免細胞受損；

選用優質培養基，減少有害物質對細胞的刺激。