傳代是貼壁細胞培養(yǎng)過程中不可或缺的一步，也是最容易出問題的一步，今天就來說下細胞傳代的操作步驟和注意細節(jié)。

操作步驟：

1.用移液器吸走原培養(yǎng)基，加入適量PBS洗1-2遍；

2.加入適量胰酶，置于培養(yǎng)箱中消化；

3.待消化到位后加入適量血清或完全培養(yǎng)基終止消化，800-1000rpm離心3-5min；

4.去上清，加入適量完全培養(yǎng)基重懸后轉移到培養(yǎng)皿，放37度培養(yǎng)箱。

注意細節(jié)：

1.吸走原培養(yǎng)基時盡量吸盡，用PBS漂洗時也是，此步驟的目的是盡量減少培養(yǎng)基中血清對胰酶消化時的影響；

2.加入胰酶量要根據(jù)培養(yǎng)皿規(guī)格和細胞量決定，通常以剛沒過細胞為宜；

3.消化時間需要同時考慮到細胞本身特性，細胞密度，胰酶濃度等多方面因素，靈活調整，切忌生搬硬套；

4.通常細胞消化到其剛好不貼壁時終止最好，如果消化不到位，靠外力強行吹下來，則細胞膜很容易被撕裂，導致傳代后出現(xiàn)細胞碎片和死細胞；如果消化過度，則細胞膜通透性會發(fā)生改變，導致傳代后出現(xiàn)凋亡細胞。

5.部分對離心敏感的細胞（主要是原代細胞），可以加入胰酶后室溫放置30s左右，然后吸去大部分胰酶，再放培養(yǎng)箱消化，消化到位后直接加入足量完全培養(yǎng)基終止消化，待其貼壁后再換液去掉殘余胰酶。

6.傳代過程中加入任何試劑都應該輕柔緩慢的加到皿壁，切忌直接加到細胞面上，如果細胞本身貼壁能力較差，可能導致細胞凋亡。