1、什么培養基中可以省去加酚紅？

研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用（特別是雌激素）。為避免固醇類反應，培養細胞，尤其是哺乳類細胞時，不用加。

2、何時須更換培養基？

視細胞生長密度而定，或遵照細胞株基本數據上的更換時間，按時更換培養基即可。

3、可否使用與原先培養條件不同的培養基？

不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應的細胞培養基，若驟然使用和原先提供的培養條件不同的培養基，細胞大都無法立即適應，造成細胞無法存活。

4、可否使用與原先培養條件不同的血清種類？

不能。血清是細胞培養上一個極為重要的營養來源，所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。

5、懸浮性細胞應如何傳代處理？

一般僅需持續加入新鮮培養基于原培養角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養液太多時，可將培養角瓶口端稍微抬高，直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞的培養液至另一新的培養角瓶，加入新鮮培養基稀釋至適當濃度，重復前述步驟即可。

6、冷凍管應如何解凍？

取出冷凍管后，須立即放入37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其盡快全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發生污染情形。另外，冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂。

7、細胞冷凍管解凍培養時，是否應馬上去除DMSO？

除少數特別注明對DMSO 敏感的細胞外，絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞)，在解凍之后，應直接放入含有10-15 mL新鮮培養基的培養角瓶中，待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附的問題。

8、欲將一般動物細胞離心下來，其離心速率應為多少轉速？

回收動物細胞，其離心速率一般為300×g（約1000 rpm），5-10 分鐘，過高的轉速，將造成細胞死亡。

9、細胞冷凍培養基的成份為何？

動物細胞冷凍保存時最常使用的冷凍培養基是含5-10% DMSO（dimethyl sulfoxide）和90-95% 原來細胞生長用的新鮮培養基均勻混合之。注意：由于DMSO 稀釋時會放出大量熱能，故不可將DMSO直接加入細胞液中，必須使用前先行配制完成。

10、冷凍保存細胞的方法？

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃，30-60分鐘→置于-20℃，30分鐘→置于-80℃，16-18小時（或隔夜）→液氮槽vaporphase長期儲存。

冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序的可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃至-80℃以下，再放入液氮槽vapor phase長期儲存。-20℃不可超過1 小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟，接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微 降低一些。

11、細胞欲冷凍保存時， 細胞冷凍管內應有多少細胞濃度？

冷凍管內細胞數目一般為1×10⁶ cells/mL vial，融合瘤細胞則以5×10⁶ cells/mL vial 為宜。

12、培養基中是否須添加抗生素？

除于特殊篩選系統中外，一般正常培養狀態下，培養基中不應添加任何抗生素。

13、CO₂培養箱的水盤如何保持清潔？

定期（至少每兩周1次）以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之。

14、 為何培養基保存于4℃冰箱中，顏色會偏暗紅色，且pH值會越來越偏堿性？

培養基保存于4℃冰箱中，培養基內的CO₂會逐漸溢出，造成培養基越來越偏堿性。而培養基中的酸堿指示劑（通常為phenol red）的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。

培養基偏堿的結果，將造成細胞生長停滯或死亡。若培養基偏堿時，可以通入無菌過濾的CO₂，以調整pH 值。

15、各種細胞培養用的dish，flask是否均相同？

不同廠牌的dish 或flask，其所coating的polymer不同，制造程序亦不同，雖對大部分細胞沒有太大之影響，惟少數細胞則可能因使用廠牌不同的dish 或flask 而有顯著的生長差異。

16 、購買的細胞冷凍管經解凍后，為何會發生細胞數目太少的情形？

研究人員在冷凍細胞的培養時出現細胞數目太少，大都是因為離心過程操作上的失誤，造成細胞的物理性損傷，以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心，應待細胞生長隔夜后再更換培養基即可。

17、購買的細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因？

研究人員在細胞培養時出現存活率不佳，常見原因可歸納為：培養基使用錯誤或培養基品質不佳。血清使用錯誤或血清的品質不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養溫度使用錯誤。細胞置于-80℃太久。

免責聲明：內容來源于網絡，版權歸原作者所有。本文僅作信息交流之目的，文中觀點不代表本網站觀點。如涉及版權問題，請及時聯系我們刪除。