流式細胞術檢測細胞凋亡（Annexin V-FITC/PI 雙染法）

一、原理

1、Annexin V-FITC

      在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內側翻向外側。Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。將Annexin V進行熒光素（FITC）標記，以標記了的Annexin V作為熒光探針，利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞早期凋亡的發生。

2、PI

    碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但對凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。

3、總結

    因此，將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時期的細胞區分開來。

二、結果分析

    在二維散點圖上，Annexin V是X軸，PI是Y軸，十字門將圖片分為四個象限。X軸及Y軸的數值表示的是熒光信號強度或散射光信號相對強度，因此可以將其染色劃分為陽性和陰性。其中根據Annexin V染色分為左右兩部分，右側（Q2/3）為Annexin V染色陽性；根據PI染色分為上下兩部分，上方（Q1/2）為PI染色陽性。一般認為Annexin V單染的細胞是凋亡早期的細胞，PI單染的細胞是已經死亡的細胞，而雙染是凋亡中期的。

  左上象限Q1：(Annexin V-FITC)-/PI+，此區域的細胞為壞死細胞。也可能有少數的晚期凋亡細胞在其中，甚至機械損傷的細胞也包含其中。

  右上象限Q2：(Annexin V-FITC)+/PI+，此區域的細胞為晚期凋亡細胞。

  右下象限Q3：(Annexin V-FITC)+/PI-，此區域的細胞為早期凋亡細胞。

  左下象限Q4：(Annexin V-FITC)-/PI-，此區域的細胞為活細胞。

  細胞凋亡率：Q2與Q3象限百分率的和。