細(xì)胞凍存和復(fù)蘇技術(shù)是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中較為基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)操作，此舉對(duì)于細(xì)胞的保種以及細(xì)胞活力的維持有著重要意義。

關(guān)于此實(shí)驗(yàn)也可以參考以下技術(shù)文章：http://www.vnkw.cn/tech_support/shownews.php?id=40

細(xì)胞復(fù)蘇與凍存操作步驟：

1.將凍存的細(xì)胞從液氮罐中取出

2.移至37℃水浴中，使細(xì)胞迅速融化

3.用酒精給手消毒

4.將所需培養(yǎng)基，要復(fù)蘇的細(xì)胞用酒精消毒后，拿入工作臺(tái)并放置酒精燈附近

5.離心管上寫好細(xì)胞名稱

6.用鑷子小心撕掉封口膜

7.打開培養(yǎng)基及離心管蓋子

8.用移液槍吸取2ml培養(yǎng)基至離心管中，蓋子過(guò)火后立馬蓋上

9.用鑷子擰開凍存管蓋子

10.1ml移液槍吹打凍存液后轉(zhuǎn)移至離心管

11.吹打幾下，混勻培養(yǎng)基和凍存液管

12.離心機(jī)1500r，3min離心存液管

13.點(diǎn)燃酒精燈

14.從離心機(jī)里取出細(xì)胞

15.配平離心管按順序放好

16.離心管底部為細(xì)胞沉淀，酒精消毒放入工作臺(tái)

17.拿出培養(yǎng)瓶，寫好細(xì)胞名稱、日期、培養(yǎng)基等基本信息

18.用移液槍移取5ml培養(yǎng)基于培養(yǎng)瓶中

19.棄去上清，用移液槍吸掉剩余廢液

20.1ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中

21.蓋上蓋子，放入培養(yǎng)箱

22.將培養(yǎng)瓶按照十字晃動(dòng)，讓細(xì)胞均勻分散

23.動(dòng)作緩慢的放入培養(yǎng)箱

24.將血清和DMSO酒精消毒后放入操作臺(tái)

25.小心去除封口膜

26.準(zhǔn)備一管9mL的血清

27.吸取1mLDMSO緩慢加入血清中混勻

28.凍存液做好標(biāo)記

29.將離心后的細(xì)胞和凍存管酒精消毒后放入操作臺(tái)

30.在凍存管上詳細(xì)標(biāo)注細(xì)胞名稱，凍存時(shí)間，操作人員等信息

31.去除上清，用移液槍吸掉剩余廢液

32.加入1mL配制好的凍存液重懸細(xì)胞

33.將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至凍存管

34.將凍存管用封口膜封口后轉(zhuǎn)移至梯度降溫盒中

35.將梯度降溫盒轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱放置過(guò)夜

36.小心取出液氮罐凍存架

37.取出將要放置的凍存盒

38.將梯度降溫盒中的細(xì)胞放入凍存盒

39.放回凍存盒

40.放回凍存架

細(xì)胞復(fù)蘇與凍存1

細(xì)胞復(fù)蘇與凍存2

細(xì)胞復(fù)蘇與凍存3

細(xì)胞復(fù)蘇與凍存4